染色體顯帶技術常用的有熒光Q-帶、Giemsa G-帶、異染色質的C-帶等。這里介紹較為常的Giensa G -帶C-帶技術。

1. G-顯帶染色體標本的制備

方法一：

（1）將配制好的0.25%的胰蛋白酶溶液60毫升倒入立式染色缸內，37℃水溶預熱，用3% Tris調pH=7

（2）將標本片浸入胰酶溶液中，不斷輕輕擺動，新鮮標本只需處理3-9秒鐘，老標本則需處理3-5分鐘。

（3）立即投入1：10或1：20的Giemsa工作液，染色15-20分鐘

（4）自來水沖凈，氣干。

方法二：

（1）45毫升生理鹽水或雙蒸水倒入立式染色缸內，加入已配好的2%胰酶液5毫升，用3% Tris溶液調pH=7于37℃預熱。

（2）把染色體標本片浸入37℃上述胰酶工作液中，略加搖動，處理30秒左右。

（3）取出后立即用1：10Giemsa工作液染色8-10分鐘，自來水沖凈。

注意事項

①胰酶的品質會直接影響顯帶的質量，購買品牌試劑較保險。

②胰酶的活性與pH值和溫度有關，在pH=7溫度37℃狀態(tài)下，胰酶活性最高。

③胰酶處理時間長短與標本片片齡有關，新鮮的標本處理時間短，且?guī)Ъy較清晰，建議標本片的片齡在2-7天內較適宜。

④Giemsa工作液要現用現配

⑤胰酶工作液長時間置37℃水浴，容易渾濁污染，應棄之。

2. C-帶染色體標本的制備

C顯帶特點：對染色體中的結構性異染色質容易染色，對常染色質只能顯示較淡的輪廓。

C顯帶所顯示著較深的結構部位：

①各染色體的著絲粒；

②各近端著絲粒的部位；

③在1、9、16號染色體具有次縊痕的位置上；

④Y染色體的長臂遠端，此部分系Y染色質部分。其它部分著色很淡。

核型分析過程，對某些染色體變異問題，往往需要C顯帶技術與G顯帶技術結合分析，更能準確判斷染色體、體的畸變。

方法一：

（1）將常規(guī)制備染色體標本片放入0.2NHCL溶液中，室溫下，處理15-30分鐘；

（2）自來水沖凈后，再將標本片浸入預溫到65℃的5% Ba(OH)2溶液中，處理10分鐘；

（3）自來水沖凈后，再把標本片投入預溫到65℃的2×SSC溶液中，處理1-1.5小時；

（4）自來水沖凈后，用1：10 Giemsa工作液染色0.5-1小時；

（5）自來水沖凈，氣干。

方法二：

（1）將制好的標本片放入0.2N HCL中，室溫下1小時；

（2）水洗凈（均用自來水沖洗）；

（3）浸入1% Ba(OH)2水溶液中，溫度預熱到50℃，處理時間15-20秒；

（4）水洗凈

（5）浸入預溫到60℃的2×SSC溶液中，處理90分鐘。

（6）用水徹底沖凈；

（7）1：10 Giemsa染色液染色10-15分鐘

（8）水沖凈、氣干。

注意事項

①標本片年齡不能超過一個月；

②各種處理溶液一定要達到所需的溫度時，才放入表本片進行處理；

③每一步處理后，要立即用自來水徹底沖凈后，才進行下一步處理。

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