活細胞紅色熒光示蹤探針
(1)產(chǎn)品內(nèi)容:
名稱:活細胞染色示蹤-紅色,貨號:CM1912 規(guī)格:0.1ml
(2)檢測原理:
PKH26是一種脂溶性熒光染料,能插入細胞膜的脂質(zhì)分子牢固結合,用于標記活細胞的膜結構。在細胞分裂時,PKH26熒光會平均分配到兩個子細胞; 熒光強度會隨著分裂次數(shù)而遞減。PKH26標記的細胞具有高穩(wěn)定性和低毒性,適用于體外和體內(nèi)長期示蹤實驗。與CFSE類似(綠色熒光),PKH26紅色熒光。
(3)具體應用:
流式細胞術分析細胞的增殖分裂,細胞染色后的示蹤或追蹤,細胞的相互作用(綠色/紅色)。
(4)試劑盒特點與保存條件
Ø 所有試劑2-6℃保存; 試劑盒在有效期內(nèi)的穩(wěn)定。不要使用已經(jīng)過期的試劑;
Ø 用前,將試劑恢復至室溫(20-25℃),探針溶液必須混勻; 應帶手套操作,使用新鮮二甲苯乙醇溶液
Ø 試劑PKH26濃度:2.5μM, 0.1ml, 1000×。
(4)檢測步驟
Ø 在室溫或37℃下,用PBS稀釋(1:1000比例)的染料,通過渦旋混勻即可。比如配制1ml溶液(利用PBS,1:1000稀釋原液)。
Ø 將其與離心沉淀的細胞一起,37℃孵育15-20分鐘,再在2-8℃放置15分鐘,離心細胞,PBS洗滌去除染料工作溶液,根據(jù)具體實驗,繼續(xù)培養(yǎng)或與其他細胞混合觀察或?qū)⑷旧募毎c其他細胞共培養(yǎng),避光。根據(jù)實際情況培養(yǎng)一段時間,一般不超過10天。
Ø 洗滌后,使用激發(fā)波長為 550nm,發(fā)射波長565nm(FL1或FITC通道)的流式細胞儀或熒光顯微鏡進行分析。
注意:使用原液;將任何剩余的溶液等分存于-20℃。避免反復凍融循環(huán),避免光照。
活細胞綠色熒光示蹤探針
(1)產(chǎn)品內(nèi)容:
名稱:活細胞染色液示蹤或分裂增殖探針,貨號:CM1911 規(guī)格:0.1ml
(2)檢測原理:
活細胞熒光示蹤探針CFSE,可以應用熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測熒光染色,分析異質(zhì)細胞群的有力工具。在所有現(xiàn)有的熒光染料中,CFSE是非熒光分子,其擴散到細胞中并被細胞內(nèi)非特異性酯酶水解以產(chǎn)生熒光產(chǎn)物。熒光產(chǎn)物僅在具有完整細胞膜和活性酯酶活性的細胞中產(chǎn)生,而死細胞不被染色。能追蹤細胞的去向和分裂,其熒光被檢測的時間大約持續(xù)10-12天左右,熒光強度隨細胞分裂而減少。
(3)具體應用:
流式細胞術分析細胞的增殖分裂,細胞染色后的示蹤或追蹤。
(4)試劑盒特點與保存條件
Ø 所有試劑2-6℃保存; 試劑盒在有效期內(nèi)的穩(wěn)定。不要使用已經(jīng)過期的試劑;
Ø 用前,將試劑恢復至室溫(20-25℃),探針溶液必須混勻; 應帶手套操作,使用新鮮二甲苯乙醇溶液
Ø 試劑CFSE濃度,:2.5μM, 0.1ml, 1000X。
(5)檢測步驟
Ø 在室溫或37℃下,用PBS稀釋(1:1000比例)的染料,通過渦旋混勻即可。比如配制1ml溶液(利用PBS,1:1000稀釋原液)。
Ø 將其與細胞一起孵育10到30分鐘,PBS洗滌去除染料工作溶液,根據(jù)具體實驗,與其他細胞混合觀察,或者,將染色的細胞與其他細胞共培養(yǎng),避光。根據(jù)實際情況培養(yǎng)一段時間,一般不超過10天。
Ø 洗滌后,使用激發(fā)波長為 490左右(FL1或FITC通道)的流式細胞儀或熒光顯微鏡進行分析。
注意:使用原液;將任何剩余的溶液等分存于-20℃。避免反復凍融循環(huán),避免光照。
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